一种聚乙二醇偶联结合超滤离心分离富集糖肽的方法-国家洁净能源知识产权运营中心

专利号	CN201110104461.X	申请日	2011/4/25
公开（公告）号	CN102757992B	授权公告日	2014/9/3
主分类号	C12P21/00	分类号	C12P21/00; C07K14/00; C07K9/00; C07K1/34
申请号	CN201110104461.X	专利类型	发明
发明（设计）人	张丽华; 侯春彦; 杨开广; 梁振; 张玉奎
申请（专利权）人	中国科学院大连化学物理研究所
摘要：本发明涉及糖肽的富集方法，具体地说是一种聚乙二醇偶联结合超滤分离富集糖肽的方法；N-连接糖蛋白质经过酶解产生的肽段混合物中加入高碘酸，糖链上的顺式邻二醇经氧化生成醛基，通过反相色谱除盐去除多余的高碘酸；向氧化后的肽段混合物中加入单甲氧基聚乙二醇酰肼(mPEG-Hz)，在乙酸－乙酸钠缓冲液中糖肽与聚乙二醇偶联；将反应产物加入超滤离心管样品池中，经过清洗和离心过滤将糖肽和非糖肽分开；糖肽保留在滤膜内，非糖肽离心到滤膜外；向样品池中再加入肽N-糖苷酶F(PNGaseF)的碳酸氢铵缓冲液，酶解后将肽段从其糖基化位点处酶切下来，经过离心即可获得含糖基化位点的肽段。本发明的优点为：是一种普适性的糖肽富集方法，具有较好的选择性，操作步骤简单，非特性吸附的清洗比较容易，成本较低。