基于两端非等重标记的蛋白质氨基酸序列从头测序方法-国家洁净能源知识产权运营中心

专利号	CN201410336907.5	申请日	2014/7/15
公开（公告）号	CN105301119B	授权公告日	2017/6/6
主分类号	G01N33/68	分类号	G01N33/68
申请号	CN201410336907.5	专利类型	发明
发明（设计）人	张丽华; 单亦初; 张珅; 吴琪; 张玉奎
申请（专利权）人	中国科学院大连化学物理研究所
摘要：本发明涉及一种基于多肽两端非等重稳定同位素标记的蛋白质氨基酸序列从头测序方法。以胞内蛋白酶赖氨酸‑C对变性还原烷基化后的蛋白质进行酶切，形成含有N端α‑氨基和C端赖氨酸侧链ε‑氨基的肽段。样品分成两份后，使用含有不同同位素的标记试剂对多肽N端α‑氨基进行选择性衍生；再使用含有不同同位素的标记试剂对多肽C端赖氨酸ε‑氨基进行衍生或者在培养细胞时，使用含有同位素标记赖氨酸的培养液来实现对蛋白质中赖氨酸的标记。最后，将样品混合，使用高效液相色谱‑质谱进行分离和鉴定。本发明通过标记形成成对存在的多肽碎片离子而加以分辨，降低干扰信号的影响，提高碎片离子选择特异性和多肽测序准确度；提高从头测序的速度。