重组牛肠激酶技术
重组牛肠激酶技术
www.ipo.dicp.ac.cn    发布时间:2014-02-28 18:47    栏目类别:生物技术

负责人:赵宗保       联络人:赵宗保

电话:0411-84379211   传真:0411-84379211   Email: zhaozb@dicp.ac.cn

学科领域:生物技术                                项目阶段:中试放大

项目简介及应用领域

肠激酶是一种高效专一性丝氨酸蛋白酶。天然肠激酶来源有限,并且从动物组织提取的肠激酶有其它蛋白污染。由于肠激酶催化亚基含有二硫键结构,三维结构稳定,并且在宿主细胞内表达会产生毒性,重组肠激酶表达和纯化一直比较困难。另外,糖基化修饰对肠激酶的活性和稳定性也有很大的影响。

    大连化学物理研究所生物质高效转化研究组建立了高效重组牛肠激酶技术。该技术以毕赤酵母GS115为宿主菌,在甲醇诱导下分泌表达重组牛肠激酶。培养液中重组牛肠激酶表达量达到3 mg/L以上。融合蛋白经镍亲和层析纯化,经SDS-PAGE电泳分析,纯度大于95%,比活达到400 u/mg (活性单位:一个活性单位为在22ºC,8小时将50 μg胰蛋白酶原95%转化为胰蛋白酶所需的酶量)。重组肠激酶在较宽pH 4.5−9.5,4−45 ºC,以及多种去污剂和变性剂存在条件下可有效切割融合蛋白。

肠激酶切割融合蛋白专一性强,效率高,广泛应用于基因工程产品的开发;尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。为提高基因工程菌表达水平和便于纯化,目前许多具有商业开发价值的药用蛋白质和多肽均采用融合表达。工艺技术要求表达的融合蛋白需要被水解,获得目的蛋白。因此,肠激酶具有广阔的市场空间。

 

合作方式

技术转让,技术服务,合作开发。
 
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